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Mise en place d’un modèle de co-culture neuroimmune pour étudier par imagerie calcique la modulation de l’activité neuronale induite par les cellules inflammatoires

Contexte :
Dans le but de proposer de nouvelles cibles thérapeutiques contre la sclérose en plaques, l’équipe IMAPATH étudie l’impact neuronal du recrutement des cellules immunitaires dans un modèle murin d’EAE.
Nos expériences d’imagerie intravitale ont montré que l’infiltration de cellules inflammatoires de type neutrophile et monocytes coincide avec la dégénération des axones de DRG dans un modèle EAE de la maladie (Caravagna et al 2018). Cette coincidence suggère un effet causal direct que nous souhaitons clarifier.
Dans ce but nous mettons en place un modèle in vitro de co-culture neuroimmune pour suivre en temps réel par imagerie la modulation de l’’activité neuronale induite ainsi que les étapes précoces de la neurodégénération. Nous utiliserons ce modèle pour étudier les mécanismes moléculaires mis en jeu dans ce processus neuroinflammatoire.

Objectifs du stage :
1. Réaliser une culture de neurones DRG exprimant la protéine GCAMP6 rapportrice de l’activité neuronale
2. Réaliser l’imagerie calcique de cette culture pour caractériser l’activité spontanée et l’activité neuronale induite par un choc de potassium extracellulaire.
3. Réaliser une culture de cellule myeloide fluorescentes et caractériser la maturation des neutrophiles et monocytes sur la base de l’expression transgénique de marqueurs fluorescent
4. Mettre en co-culture les neurones GCAMP6 avec des populations de cellules myeloides dans différents états de maturation et caractériser la modulation induite de l’activité neuronale ou les évènements de mort neuronale
5. Introduire des cytokines pertinentes dans le milieu pour réduire l’effet neuronal des cellules inflammatoire
6. Suivant l’avancée du stage ces observations seront confirmées sur coupes immunohistochimique et in vivo

Techniques :
1. Culture primaire de neurones
2. Culture primaire de cellules immunitaires
3. Pharmacologie
4. Imagerie calcique
5. Videomicroscopie
6. Immunohistochimie
7. Imagerie intravitale biphotonique

Encadrement :
Bruno Hivert
Franck Debarbieux

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